中藥經(jīng)中藥超微粉碎機(jī)超微粉碎處理后，其粒度均勻，比表面積增加，孔隙率增大，易于溶出。當(dāng)歸片是單味藥經(jīng)制備浸膏后、混以原藥材粗粉以及大量輔料、再經(jīng)濕法制粒壓片制成，其所含主藥比例小，服用量大，且因?yàn)楹刑欠郏贿m用于胃病、糖尿病患者。鑒于上述制劑的缺陷和不足，本實(shí)驗(yàn)通過測定阿魏酸的含量，確定當(dāng)歸片劑的最佳工藝。
一、材料與方法
1. 藥品、試劑與儀器
當(dāng)歸，產(chǎn)自甘肅岷縣，購自甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，藥材經(jīng)甘肅中醫(yī)藥大學(xué)鑒定教研室王明偉教授鑒定符合 2015 版《中國藥典》規(guī)定，當(dāng)歸浸膏片、當(dāng)歸極細(xì)粉片、當(dāng)歸超微片，均本實(shí)驗(yàn)室自制;阿魏酸對(duì)照品，含量 ＞ 99. 32% ，規(guī)格: 每片 20 mg。乙腈; 磷酸；乙酸乙酯；高效液相色譜儀； WFH －201B 紫外反射透射儀；中藥超微粉碎機(jī)，濟(jì)南天方機(jī)械有限公司生產(chǎn)。
2. 實(shí)驗(yàn)方法
（1）以薄層色譜法進(jìn)行定性檢測
①溶液的制備
對(duì)照品: 稱取阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)品 3. 3 mg，用 70% 甲醇溶液定容，濃度為 0. 33 mg· mL － 1。供試品: 稱取當(dāng)歸浸膏片、當(dāng)歸極細(xì)粉片、當(dāng)歸超微片粉末 3. 0 g，加 1% 碳酸氫鈉溶液 50 mL，超聲處理 10 min，離心，取上清液用稀鹽酸調(diào) pH 至 2 ～ 3，用乙醚振搖提取 2 次，每次 20 mL，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)蛹状?span> 1 mL 使溶解，作為供試品溶液。
②薄層條件
吸取上述 3 種溶液 10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠 G薄層板上，以環(huán)己烷 － 二氯甲烷 － 乙酸乙酯 － 甲酸( 4∶ 1 ∶ 1 ∶ 0. 1) 為展開劑展開，取出，晾干，置紫外燈( 365 nm) 下檢查。
（2）阿魏酸含量檢測
①溶液的制備
對(duì)照品: 與 2. 1. 1 制備的對(duì)照品相同。
供試品: 稱取當(dāng)歸片劑粉末、當(dāng)歸粗粉、當(dāng)歸浸膏粉末各 1 份，均為 0. 50 g，加 70% 甲醇定容后，振蕩 10min，超聲提取 30 min。提取液過濾，用 0. 45 μm 微孔濾膜過濾，作為供試品溶液。
②色譜條件篩選
流動(dòng)相系統(tǒng)經(jīng)對(duì)以下這 4 種流動(dòng)相: ( 1)甲醇 － 1% 磷酸水洗脫; ( 2) 乙腈 － 1% 磷酸水洗脫;( 3) 乙腈 － 0. 085% 磷酸水洗脫; ( 4) 乙腈 － 0. 05% 磷酸水洗脫系統(tǒng)，進(jìn)行篩選后得知，乙腈 － 0. 05% 磷酸梯度洗 脫 吸 收 峰 數(shù) 目 多，峰 形 好，更 優(yōu) 于 乙 腈 －0. 085% 磷酸水洗脫系統(tǒng)。故流動(dòng)相系統(tǒng)選用乙腈 －0. 05% ( 16∶ 84) 磷酸洗脫。洗脫時(shí)間: 25 min。進(jìn)樣量: 10 μL。檢測波長 將樣品溶液分別在 280，322，316，254，270 nm 處檢測。結(jié)果顯示，阿魏酸在 316 nm 處出峰數(shù)目最多，吸收峰大，且各峰響應(yīng)值較高，基線穩(wěn)定。
（3）方法學(xué)考察
①專屬性實(shí)驗(yàn)
吸取阿魏酸對(duì)照品、不同當(dāng)歸片劑供試品溶液各10 μL，設(shè)定高效液相色譜條件: 乙腈 － 0. 05% 磷酸水( 16∶ 84) ，流速 1. 0 mL·min － 1，檢測波長 316 nm，柱溫 28 ℃，時(shí)間: 25 min。
②線性關(guān)系
吸取上述制備的阿魏酸對(duì)照品溶液 0. 1，0. 2，0. 3，0. 4，0. 5 mL，用 70% 的甲醇溶液定容，用 0. 45μm 的微孔濾膜過濾，分別進(jìn)樣 10 μL。
③精密度實(shí)驗(yàn)
將阿魏酸對(duì)照品溶液在上述色譜條件下進(jìn)樣 10
μL，分別測定 6 次。
④加樣回收率實(shí)驗(yàn)
吸取已知含量的樣品各 5 份，分別加入一定量的阿魏酸對(duì)照品，制備供試品 5 份，進(jìn)樣量 10 μL，進(jìn)行HPLC 測定。
⑤重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)
取 70% 甲醇超聲提取的供試品，在上述相同色譜條件下進(jìn)樣 6 針，測得阿魏酸的含量。
⑥ 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
取供試品溶液在上述色譜條件下，分別在 0，6，12，24，36，72 h 進(jìn) 樣 10 μL，測定各成分峰面積積分值。
（4） 含量計(jì)算
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線外標(biāo)法，計(jì)算樣品中阿魏酸含量。結(jié) 果薄層色譜定性在紫外燈( 365 nm) 下，當(dāng)歸超微粉片、極細(xì)粉片、當(dāng)歸浸膏片供試品與阿魏酸對(duì)照品的薄層色譜在相
應(yīng)的位置上顯示相同顏色的熒光斑點(diǎn)。說明當(dāng)歸在不同程度粉碎后所制的片劑中均含有阿魏酸，且無明顯質(zhì)的變化。
二、方法學(xué)評(píng)價(jià)
1. 專屬性 進(jìn)樣后的色譜圖見圖。由圖可知，各成分分離度良好，方法專屬性良好。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程 阿魏酸的回歸方程為 y = 49. 20x+ 13. 36( Ｒ2 = 0. 9995) ，表明線性關(guān)系良好。
2. 精密度與加樣回收率 對(duì)照品溶液阿魏酸峰面積的 ＲSD 為 1. 13% ( n = 6) ，結(jié)果表明精密度良好。測得當(dāng)歸超微粉碎片阿魏酸的平均回收率為( 100. 00 ± 1. 40) % ( n = 5) ，當(dāng)歸極細(xì)粉片阿魏酸的平均回收率( 97. 90 ± 1. 68) % ( n = 5) ，當(dāng)歸浸膏片阿魏酸的平均回收率( 95. 40 ± 1. 09% ) ( n = 5) ，表明本法回收率高。
3. 重現(xiàn)性與穩(wěn)定性 測得阿魏酸含量的 ＲSD 為0. 93% ，表明重現(xiàn)性良好。測得各成分峰面積積分值，阿魏酸 ＲSD 為 1. 02% ，表明供試品溶液在 72 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。
http://www.www.riggosuavethestagegod.com
三、 阿魏酸含量
利用天方中藥超微粉碎機(jī)將當(dāng)歸超微粉碎后，水溶性成分阿魏酸的含量高于當(dāng)歸粗粉中水溶性成分阿魏酸的含量，說明超微粉碎有利于提高當(dāng)歸中水溶性成分阿魏酸的溶出量。本實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)歸浸膏片阿魏酸的含量雖然略高于超微粉碎片中阿魏酸的含量，但浸膏片的出膏率僅有 37% ，按同等質(zhì)量的生藥量計(jì)算，當(dāng)歸超微粉碎片中阿魏酸的含量遠(yuǎn)高于浸膏粉，說明當(dāng)歸超微粉碎后，所含有效成分阿魏酸溶出明顯增加。當(dāng)歸超微粉由于粒徑達(dá)到 75 μm 以下，色譜圖中的峰數(shù)較多，溶出率提高。結(jié)果見表。
四、結(jié) 論
本實(shí)驗(yàn)用薄層色譜法對(duì)處方中藥材進(jìn)行定性鑒別; 用高效液相色譜法測定片劑中阿魏酸的含量。阿魏酸在一定濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，本方法簡便、準(zhǔn)確，可用于該制劑的質(zhì)量控制。關(guān)于中藥超微粉碎機(jī)超微粉碎技術(shù)可將固體物質(zhì)直接粉碎成直徑在微米級(jí)的粉體，并且破壁率特別高，故將它用于中藥制劑的制備，可提高藥材中有效成分的釋放。另外，當(dāng)歸超微粉細(xì)度的增加，可改善口感，便于中藥含片、口崩片、干粉吸入劑和噴霧劑的新劑型開發(fā)。當(dāng)歸超微粉碎后，由于粉末粒子有巨大的表面能，粉體很容易互相吸附、團(tuán)聚，加入溶劑后會(huì)形成黏塊，不利于成分溶出。因此，在提取時(shí)，應(yīng)先使其充分分散于提取介質(zhì)中，可用振蕩儀器使其分散。從當(dāng)歸不同粒徑的化學(xué)成分溶出情況可以看出，當(dāng)歸超微粉由于粒徑達(dá)到 75 μm 以下，色譜圖中的峰數(shù)較多，溶出率提高，此種情況下，當(dāng)歸藥材所含藥效學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)與普通中藥飲片或制劑相比，其藥效特征更加明顯。
